1．目的：建立本公司化驗室用Waters e2695高效液相使用與維護的標準操作程序，規范Waters高效液相的正確使用和校準，保證測量結果正確無誤。
2．范圍：適用于本公司化驗室Waters e2695高效液相的操作與維護。
3．術語：
4．職責：
化驗室QC人員負責本規程的執行；
質保部長負責本規程執行情況的監督。
5．操作程序與方法：
5.1 儀器組成及電源：
5.1.1 儀器組成：本儀器由泵、進樣器、紫外檢測器、柱溫箱和Empower色譜工作站組成。
5.1.2 電源：泵為220V穩壓電源，檢測器為220V穩壓電源，工作站為220V穩壓電源。
5.2 外部硬件的操作：
5.2.1依次打開電腦、液相分離單元和檢測器電源，液相分離單元進行開機自檢（注：打開順序錯誤可導致軟件與儀器連接不上）。同時檢查流動相和10%甲醇的體積是否充足。
5.2.2開機自檢后，"分離單元"將進入Idle（空閑）模式。
5.2.3沖洗密封墊，主屏幕下按【Diag】→"Diagnosities"界面，按Prime Seal Wash顯示"Prime Seal Wash"屏幕，按【Start】，待排放口有水流出（氣泡排凈）時（約1分鐘），按【Halt】停止，按【Close】關閉界面。（注：10%甲醇足夠多）5.2.4沖洗進樣針，按Prime Ndl Wash 顯示"Prime Ndl Wash"屏幕，按【Start】，待自動停止。清洗兩次，按【Close】關閉界面。（注：可配制與實驗用流動相相同溶液）
5.2.5濕法灌注：按【Exit】退出"Diagnosities"界面，按【Menu/Status】，進入"Status（1）"屏幕，在"Compomtion"中對所灌注的管路輸入100%，按【Direct Function】，光標選"Wet Prime"，按【Enter】，顯示"Wet Prime"后按【OK】，待結束后，依次重復操作對所用管路（A/B/C/D）進行灌注。
5.2.6沖洗自動進樣器，在"Status（1）"屏幕下，按【Direct Function】，光標選"Purge Injector",按【Enter】，顯示"Purge Injector"界面，按【OK】。
5.3點開Empower Pro軟件圖標,進入操作界面。
5.3.1 單擊鼠標左鍵進入"配置系統"。選中"項目"后，單擊 "新建項目"。 出現"新建項目向導"，"表空間"中接受50MB的表空間缺省設置。在該向導步驟中，系統默認設置了"支持全面審計追蹤"。如果不需要，可取消"支持完全審計追蹤"復選框，以取消對項目元素（如方法和樣品）所做的所有修改的記錄。如需要，則選中該復選框之后，還再選擇是否需要對"方法變化"、"結果變化"、"樣品信息變化"和"刪除"的更改進行注釋。單擊"下一步"。"選項"頁中，選擇用于本項目的選項。單擊"下一步"。"訪問控制"頁中，根據需要選擇設置對您所創建的項目具有訪問權限的用戶和用戶組或者接受缺省的選項，然后單擊"下一步"。 在"復制"中，接受默認的選項，然后單擊"下一步"。在"輸入名稱"頁中，輸入項目的名稱，必要時輸入注釋內容。最后單擊"完成"來結束新項目的創建。 項目列表中出現新建的項目名稱。
5.3.2 分析方法的建立：單擊命令欄上的View Method，如果出現"New Processing Parameters"頁，選擇 LC，然后單擊 OK。單擊命令欄上的 Instrument Parameters。 儀器參數出現在"View Method"工作區中，在此頁面下，點擊"Pump"設置：A泵流速、B泵流速、總流速以及柱溫，柱壓上限一般設在3500，下限一般設在70。再點擊"UV Detector"設置：波長、單雙波長。 從"File"菜單中選擇 Save As。"Save current method"對話框將出現，在"Name"文本框中輸入"方法名稱"，在"Comments"文本框中輸入有關該方法的注釋（可選），然后單擊Save。
5.3.3 平衡系統：單擊采集欄上的 (Equilibrate)。采集欄上"Status Information"部分將顯示系統平衡的狀態。從下拉列表中選擇"自己方法名稱"，然后單擊 Equilibrate。為系統留出大約30分鐘以上時間進行平衡，或直到基線穩定。
5.4測定操作：
5.4.1 單針進樣，可以單擊左下角的圖標，出現以下"單針進樣參數"對話框：在Method 下拉菜單中，可以選擇指定的儀器參數，在所有參數設定完畢后，即可單擊"Inject"鍵開始進樣。同樣可以通過圖標終止進樣。
5.4.2 樣品組進樣，a．在"方法組"下拉菜單中選擇欲使用的方法組，同時在下方的"儀器方法"下拉菜單中，選擇欲使用的儀器方法。。b. 在sample set 表單中，逐行填寫"Sample Name"、"Function"以及"Method"與"Run Time"、"Inj of Vail"" ＃ of Injs"后，即可點擊圖標。c. 一旦點擊圖標后，會出現如下"Run Sample Set"對話框：在對話框中寫入樣品組的名稱，然后點擊"Run"，即可運行樣品組。d. 如果運行中需要終止樣品組的運行，可點擊圖標，終止運行。
5.5 數據的處理
5.5.1 利用向導建立處理參數
a．在Find Data中的選中要處理的樣品，單擊（Review，查看）圖標，打開數據。
b. 單擊（處理方法向導，Processing Method Wizard），出現對話框。
c. 選擇"Start New Processing Parameters" （建立新的處理參數）。然后單擊"OK"。
d. 如果出現下面的對話框，選擇"LC"，然后單擊OK。
e. 在"Integration－Integration Region"頁面中，在空格中輸入，或者在圖上用鼠標左鍵拖拽來選擇積分的起止時間，然后單擊"Next"。
f. 出現"Peak Width and Threshold"頁面，接受默認的數值，不作改動，單擊"Next"。
g. 在"Peak Rejection"頁中，根據需要設定最小面積和/或者最小峰高（也可不設），然后單擊"Next"。
h. 在"Calibration－General"頁中，選擇定量的方式：Area，校正曲線的擬合方式：Linear（線性）。然后單擊"Next"。
i. 在"Name" 欄中編輯組分名稱（注意，此處的名稱必須與在前面"Alter Sample"中所輸入的名稱一致）。然后單擊"Next"。
j. 在此頁面中，不作任何改動，單擊"Next"。
k. 在此頁面中，選擇校正的類型（type of Calibration），如為外標法，選"External Standard Calibration"，單一內標法（即較為常用的內標法）選擇"Single Internal Standard",并在下拉菜單中選擇內標峰，然后單擊"Next"。
j. 出現"Method Name"頁，輸入方法名稱，必要時輸入注釋（Comments）。單擊"Finish"完成向導。
k. 單擊 (Save all)保存全部。
5.5.2 定量計算
a． 回到"Find Data"的Channel選項卡。
用鼠標選擇標樣以及未知樣品（注意一定要先選擇標樣，再選擇未知樣），然后單擊右
鍵出現快捷菜單，選擇Process。出現如下窗口：在Peocess中，選"Use specified method"（使用指定的方法），并在下拉菜單中選擇剛才利用向導建立的方法。單擊"OK"。
b．到"Results"（結果）選項卡中，單擊"Updata"鍵更新結果。
c. 選中欲瀏覽的結果，單擊（Review，查看），出現查看主窗口，在色譜圖下方的"Peak"表中，"Amount"欄中，即可看到定量的結果。
d. 單擊工作欄中的（Calibration Curve，校正曲線），打開校正曲線窗口。
窗口的上部為曲線的方程等內容。可通過下拉菜單查看不同組分的相關信息。
5.5.3數據的打印
1. 在"Results"選項卡中選擇欲打印的結果，單擊（預覽出版）。出現"打開報告方法"對話框。可以選擇選擇"Use a Report Method that was generated to appropriate for the selected data（使用對選中的數據適用的報告方法）"，或者在"Use the following Report Method(使用以下的報告方法)"下拉菜單中選擇適當的報告方法(例如LC Calibration Report，LC校正曲線
報告)，然后單擊"OK"。
2. 預覽無誤后，可單擊，進行打印。
5.6關機操作：
5.6.1全部測定完畢后，按規定用適當溶劑沖洗泵、進樣閥、色譜柱和檢測器。
5.6.2關閉檢測器、泵及其他部件電源并拔下各插頭，做好使用登記。
5.7維護與保養：
5.7.1試驗所用的流動相應經過0.45μm的膜過濾,以降低色譜柱受污染的程度,延長使用壽命。
5.7.2試驗前先打開電源穩壓器,待電壓穩定后,方可打開儀器開關。
5.7.3色譜柱最高工作壓力一般不能超過3500。
5.7.4檢測器的光源具有一定的使用時間，所以每次在進樣品前半小時左右打開，試驗結束后，應先關閉檢測器電源。
5.7.5最后一次進樣完成后，應用流動相沖洗一段時間，以保證洗脫完全，然后用純水沖洗約半小時，以除去流動相中的無機鹽類。
5.7.6最后用甲醇對色譜柱進行再生保存。
5.7.7操作者應細心了解儀器各部件性能。
5.7.8每次操作完畢后，應及時清理所用物件，倒掉廢瓶中的廢液，用柔軟的抹布擦拭儀器表面，保持儀器的清潔。
5.7.9若儀器長時間不用，可定期加電，使儀器預熱一段時間，以免儀器內部件受潮。
5.7.10為保證檢驗數據的可靠，每年應由計量部門負責校驗一次。
5.8數據安全與備份管理
5.8.1 實驗員使用前，首先必須分別授權軟件的使用賬號和密碼，并且確保防止泄露。不同實驗員對應不同賬號，不得共享。
5.8.2 未經質保部經理允許，任何人不得私自修改儀器參數、方法參數。
5.8.3 每3個月對各賬號的實驗數據進行一次備份，存檔至其他受控的計算機中。
